生物素与亲和素

生物素亲和素系统的特点主要表现在以下几个方面,1.灵敏度:生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合,形成的生物素衍生物,不仅保持了大分子物质的原有生物活性,而且比恬度高,具多价性,此外,每个亲和素分子有四个生物素结合部位,可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物,因此,生物素－亲合素系统具有多级放大作用,使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度,2.特异性:亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力,其反应呈高度专一性,因此,BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时,并不增加非特异性干扰,而且,BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响,使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用,3.稳定性:亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍,二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合,因此,BAS在实际应用中,产物的稳定性高,从而可降低操作误差,提高测定的精确度,4.适用性:生物素和亲和素均可制成多种衍生物,不仅可与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合,用于检测体液、组织或细胞中的抗原-抗体、激素—受体和核酸系统以及其他多种生物学反应体系,而且也可制成亲和介质,用于分离提纯上述各反应体系中的反应物,此外,多种BAS的商品化试剂,为临床检测和科研工作提供了有利条件,5.其他:生物素－亲合素系统可依据具体实验方法要求制成多种通用性试剂（如生物素化第二抗体等）适用于不同的反应体系,而且都可高度稀释,用量很少,实验成本低；尤其是生物素－亲合素系统与成本高昂的抗原特异性第一抗体偶联使用,可使后者的用量大幅度减少,节约实验费用．此外,由于生物素与亲和素的结合具高速、高效的特性,尽管生物素－亲合素系统的反应层次较多,但所需的温育时间不长,实验往往只需数小时即可完成

生物素－亲合素系统原理:生物素－亲合素系统是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素与亲和素间的高度放大作用,而建立的一种检测系统,亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,分子量为68kDa,由4个亚单位组成,对生物有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1),生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合,这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的,